簡(jiǎn)要描述:
結(jié)合態(tài)淀粉合成酶(GBSS)測(cè)試盒以束縛態(tài)存在于淀粉體中,催化淀粉鏈的加長(zhǎng)反應(yīng),主要負(fù)責(zé)直鏈淀粉的合成。
更新時(shí)間:2024-09-02;廠商性質(zhì):經(jīng)銷商;覽量:1128
商品詳情:
結(jié)合態(tài)淀粉合成酶(GBSS)測(cè)試盒測(cè)定意義
GBSS(EC 2.4.1.21)以束縛態(tài)存在于淀粉體中,催化淀粉鏈的加長(zhǎng)反應(yīng),主要負(fù)責(zé)直鏈淀粉的合成。
貨號(hào) | 規(guī)格 | 檢測(cè)方法 |
YSH3340-1 | 100管/96樣 | 微量法 |
YSH3340 | 50管/48樣 | 紫外分光光度法 |
YSH3340 | 25管/24樣 | 紫外分光光度法 |
測(cè)定原理
GBSS催化ADPG與淀粉引物(葡聚糖)反應(yīng),將葡萄糖分子轉(zhuǎn)移到淀粉引物上,同時(shí)生成ADP;進(jìn)一步通過反應(yīng)體系中添加的酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶依次催化NADP+還原為NADPH,其中NADPH生成量與前一步反應(yīng)生成的ADP數(shù)量呈正比,通過340nm下測(cè)定NADPH的增加量,可以計(jì)算GBSS活性。
需自備的的儀器和用品
紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
樣品中AA提?。?/span>
1.按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進(jìn)行室溫勻漿,然后轉(zhuǎn)移到1.5 mL EP 管中,蓋緊后(防止水分散失)置于沸水浴提取15 min;自來水冷卻后,8000g,,4℃離心10min,上清液置冰上待測(cè)。
2.細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL試劑一),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g,4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
3.血清等液體:直接檢測(cè)。
計(jì)算公式如下:
1、血清(漿)LAP活力的計(jì)算:
單位的定義:每mL血清(漿)每分鐘生成1 nmol的對(duì)硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。
LAP(nmol/min/mL)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷V樣÷T=205.8×ΔA
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中LAP活力的計(jì)算:
(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算:
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol 對(duì)硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。
LAP(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=205.8×ΔA÷Cpr
(2)按樣本鮮重計(jì)算:
單位的定義:每g組織每分鐘生成1 nmol 對(duì)硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。
LAP(nmol/min /g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=205.8×ΔA÷W
(3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:
單位的定義:每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘生成1 nmol 對(duì)硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。
LAP(nmol/min /104 cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(2000×V樣÷V樣總) ÷T=0.103×ΔA
V反總:反應(yīng)體系總體積,2×10-4 L;ε:對(duì)硝基苯胺摩爾消光系數(shù),9.72×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.05 mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,2 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;2000:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),2000萬。
注意事項(xiàng):
1. 試劑盒中試劑三、試劑四和標(biāo)準(zhǔn)品均需臨用前配制,且避光保存,配制好未使用完的4℃保存且3天內(nèi)使用完畢。
2. 為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,需先取1-2個(gè)樣做預(yù)實(shí)驗(yàn),如果測(cè)定的吸光值過高(高于2.5),用蒸餾水稀釋后再測(cè)定。
3. 與茚三酮反應(yīng)在570nm處無吸收峰,因此,570nm處測(cè)定結(jié)果不含這兩種氨基酸的量。
4.檢出限為100μmol/L。
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葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白7ELISA試劑盒 GLUT7免費(fèi)代測(cè)試劑
葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白6ELISA試劑盒 GLUT6免費(fèi)代測(cè)試劑
葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白5ELISA試劑盒 GLUT5免費(fèi)代測(cè)試劑
葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白14ELISA試劑盒 GLUT14免費(fèi)代測(cè)試劑
葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白12ELISA試劑盒 GLUT12免費(fèi)代測(cè)試劑
葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白11ELISA試劑盒 GLUT11免費(fèi)代測(cè)試劑
葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白10ELISA試劑盒 GLUT10免費(fèi)代測(cè)試劑
葡萄糖磷變位酶5ELISA試劑盒 PGM5免費(fèi)代測(cè)試劑
葡萄糖磷變位酶3ELISA試劑盒 PGM3免費(fèi)代測(cè)試劑
葡萄糖磷變位酶2樣蛋白1ELISA試劑盒 PGM2L1免費(fèi)代測(cè)試劑
結(jié)合態(tài)淀粉合成酶(GBSS)測(cè)試盒β葡萄糖苷酶(β-GC)/纖維二糖酶測(cè)試盒/分光光度法50管/24樣
β葡萄糖苷酶(β-GC)/纖維二糖酶測(cè)試盒/微量法100管/48樣
β-葡萄糖醛苷酶(β-GD)測(cè)試盒/比色法50管/48樣
β-葡萄糖醛苷酶(β-GD)測(cè)試盒/分光光度法50管/48樣
β-葡萄糖醛苷酶(β-GD)測(cè)試盒/微量法100管/96樣
γ-氨基丁(GABA)測(cè)試盒/分光光度法50管/48樣
γ-氨基丁(GABA)測(cè)試盒/微量法100管/96樣
γ-谷氨酰半連接酶(GCL)測(cè)試盒/比色法50T/24樣
γ谷氨酰半連接酶(GCL)測(cè)試盒/分光光度法50管/48樣